CRISPR
CRISPR/Cas9基因編輯工(gōng)具介紹
規律間(jiān)隔成簇短回文(wén)重複序列（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR）本身(shēn)是一種防禦系統，用以保護細菌和(hé)古細菌細胞不受病毒的(de)侵害。在這(zhè)些生(shēng)物(wù)基因組中的(de)CRISPR位點能表達與入侵病毒基因組序列相(xiàng)匹配的(de)小(xiǎo)分子(zǐ)RNA 。當微(wēi)生(shēng)物(wù)感染了這(zhè)些病毒中的(de)一種，CRISPR RNA就能通(tōng)過互補序列結合病毒基因組，并表達CRISPR相(xiàng)關酶，也就是Cas，這(zhè)些酶都(dōu)是核酸酶，能切割病毒DNA ，阻止病毒完成其功能。
Cas9酶受sgRNA引導靶向切割DNA雙鏈的(de)分子(zǐ)機(jī)制
該切割DNA的(de)機(jī)制與2012年(nián)被證實廣泛适用于真核生(shēng)物(wù)，從(cóng)而引發了後續的(de)以CRISPR/Cas9為(wèi)基礎的(de)第三代基因編輯工(gōng)具的(de)研究熱潮。在真核細胞中雙鏈的(de)DNA打斷（Double strand break, DSB）可以引發兩種修複機(jī)制，其中非同源末端結合（Non-homologous end joining, NHEJ）可以産生(shēng)數個(gè)堿基的(de)随機(jī)删除或插入，從(cóng)而引發移碼突變，這(zhè)便是基因編輯工(gōng)具進行基因敲除的(de)原理(lǐ)；此外(wài)在有(yǒu)同源序列存在時(shí)可以進行同源重組修複，該機(jī)制可以實現(xiàn)外(wài)源基因的(de)敲入或者定點修飾。
CRISPR/Cas9技(jì)術特點
相(xiàng)比前兩代基因編輯工(gōng)具ZFN系統和(hé)TALEN系統，其優點顯著：
首先，CRISPR-Cas9系統的(de)可用位置更多。理(lǐ)論上(shàng)基因組中每8個(gè)堿基就能找到一個(gè)可以用CRISPR-Cas9進行編輯的(de)位置，可以說(shuō)這(zhè)一技(jì)術能對(duì)任一基因進行操作(zuò)，而TALEN和(hé)ZFN系統則在數百甚至上(shàng)千個(gè)堿基中才能找到一個(gè)可用位點，這(zhè)大大限制了使用範圍。
其次，Cas9擴展性強，正如本公司使用的(de)Cas9n，是一種隻進行單鏈切割的(de)Cas9突變型，該酶可以大大降低(dī)切開(kāi)雙鏈後帶來(lái)的(de)非同源末端連接造成的(de)染色體(tǐ)變異風(fēng)險。此外(wài)還(hái)可以将Cas9蛋白連接其他(tā)功能蛋白，來(lái)在特定DNA序列上(shàng)研究這(zhè)些蛋白對(duì)細胞的(de)影響。
第三，更為(wèi)重要的(de)是，CRISPR-Cas9系統的(de)使用極為(wèi)方便，隻需要替換一段核酸序列，幾乎任何實驗室都(dōu)可以開(kāi)展工(gōng)作(zuò)。
中科(kē)生(shēng)物(wù)CRISPR/Cas9載體(tǐ)構建服務優勢
1.本公司提供的(de)質粒均來(lái)源于最新的(de)頂尖雜(zá)志(zhì)中已使用過的(de)系統，其有(yǒu)效性已被反複被驗證。
2.靶點的(de)篩選: 不同靶點的(de)有(yǒu)效性存在差異，本公司免費(fèi)為(wèi)您設計(jì)三個(gè)特異性靶點。
3.載體(tǐ)系統的(de)構建：腺病毒CRISPR系統、雙切口CRISPR系統、lentiCRISPR系統、常規CRISPR系統等，根據客戶的(de)不同需要，提供個(gè)性化(huà)載體(tǐ)構建服務。
